人视网膜色素上皮细胞表达低氧诱导因子的研究

　　背景：低氧诱导因子(HIF)是许多促血管新生因子的上游转录因子。而视网膜色素上皮细胞是促血管新生因子产生的重要源头。本研究探讨视网膜色素上皮细胞中HIF的表达，脯氨酸羟化酶对其表达的调节作用，以及下游的内皮细胞生长因子(VEGF)和促红细胞生成素(EPO)的表达，从而阐明缺血性视网膜疾病诱导新生血管发生的分子机制。

　　方法：将视网膜色素上皮细胞株-ARPE-19细胞放入缺氧环境下进行培养，缺氧培养后不同时间点取细胞进行后续实验。采用western blot和密度定量技术检测细胞中的HIF和脯氨酸羟化酶同分异构体表达水平。采用酶联免疫吸附反应检测细胞培基中的VEGF和EPO分泌型蛋白表达水平。采用realtime-PCR技术检测细胞中VEGF和EPO mRNA表达水平。运用siRNA来诱导RNA干扰效应。

　　结果：缺氧培养后，ARPE-19细胞中HIF-1a表达水平迅速增高，而HIF-2a和 HIF-3a 表达水平并未发生明显改变。缺氧培养24小时内，HIF-1a蛋白表达水平呈增高趋势而HIF-1a mRNA表达水平呈波动趋势。缺氧培养36小时后HIF-1a蛋白表达降至基线水平，脯氨酸羟化酶2和3表达水平的变化与HIF-1a蛋白相一致。干扰HIF-1a引起VEGF表达水平降低，而对EPO蛋白的表达无明显影响。

　　结论：HIF-1a是ARPE-19细胞中主要的功能性同分异构体。缺氧环境下，HIF-1a表达水平可能通过转录和转录后水平的反馈途径进行自身调节。RPE细胞中，HIF-1a是VEGF的重要调控因子。但RPE细胞不是缺氧环境下产生EPO的主要来源，其他的视网膜细胞和转录因子负责RPO的表达。